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                如何作好軟瓊脂實(shí)驗(yàn)分析

                更新時(shí)間:2019-08-01      點(diǎn)擊次數(shù):2097

                軟瓊脂(soft agar)實(shí)驗(yàn)一般用來檢測細(xì)胞的集落形成能力。現(xiàn)在這種方法越來越多的用于分離癌細(xì)胞,也可以用來確認(rèn)癌細(xì)胞是否具有癌化特性,為進(jìn)一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡單,但如果細(xì)節(jié)掌握不好,往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或數(shù)據(jù)缺乏說服力。如果你曾經(jīng)在這個(gè)實(shí)驗(yàn)上栽了跟頭,請不妨在如下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試:

                1.要確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)(>80℃),尤其是在做基底時(shí),如果瓊脂凝固過快會(huì)導(dǎo)致基底不均一;

                2. 做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡,一旦有小氣泡產(chǎn)生,應(yīng)該立即將氣泡趕走;

                3. 應(yīng)使用2倍濃度的培養(yǎng)基,并加入20%FBS 和2%的P/S;

                4. 在制備上層時(shí),混合液體需要有順序,一般為在同一個(gè)移液管中先吸取液態(tài)瓊脂,再吸取同體積的2倍濃度的培養(yǎng)基,后在吸取2倍體積的細(xì)胞懸液,這樣既可以保證瓊脂不立即固化,又可以有效避免細(xì)胞因溫度過高而燙死;

                5. 因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)周期較長,為避免過度蒸發(fā)而導(dǎo)致瓊脂裂解,需要保證小環(huán)境持久濕潤,一般可在六孔板或培養(yǎng)皿下面墊上三到四層濕潤的薄紙。

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